Povezane imunski test (ELISA, ELISA). Bistvo načela metode in fazah raziskave. Analiza protiteles razredov protiteles, imunskim kompleksom.

V zvezi z razvojem celične tehnologije, molekularne biologije, genetike, fizike, kemije in mnogih drugih visokotehnoloških področij v vsakodnevno prakso uvajajo nove visoke natančnosti in visokotehnoloških metode. Ti trendi vplivajo in interdisciplinarno področje medicinskega znanja, in s tem povezanih področjih bioloških, biokemičnih težave. razširjena in uvedbo razširjene metode klinične laboratorijske diagnostike, ki se imenuje encim imunski test za zadnjih deset let.

Na splošno je tehnologija imunoloških in encimskih reakcij radiološka pogosto uporablja v celici tipkanje, celičnih kultur različnih tkiv iz začetka 80. let XX stoletja. Vendar pa so bile te metode zelo zamudno, ni enotna, ni standardizirana, kar izključuje njihovo uporabo v terapevtske in diagnostične namene v krdelo. Te metode uporabljajo ozko, visoko tehnologijo in visoko specializiran laboratorij.

Vendar pa se z napredovanjem tehnologije, Mikrotehnologija, ki proizvaja različne biopolimer materialov iz mogoče pripraviti pripravljene sklope ELISA diagnostiko, ki bodo lahko uporabljali laboratorij zdravstvene ustanove generalist. ELISA se pogosto uporablja za diagnozo različnih okužb (Chlamydia, sifilis, citomegalovirus, toksoplazmoza, herpes, itd), tako akutnih kot kroničnih in latentne oblike, ki se pojavijo brez kliničnega simptomov.Takzhe To metodo uporabimo za zatiranje kronične bolezni. Poskusimo razumeti, kaj je ta metoda in katera načela je utemeljena?

Komponente povezana testom - imunski odziv in encimsko reakcijo

Encimski imunski test, kot pove že samo ime, je sestavljen iz dveh komponent - imunskih reakcij in encimskih reakcij. Imunski odziv proizvaja zavezujoče biološke molekule, celice ali mikroorganizem celice, ki se dejansko trudijo, da bi našli in encimska reakcija nam omogoča, da vidite in merjenje rezultat imunološko reakcijo. To pomeni, da imunski odziv - je del zapletene tehnike, ki dejansko zazna želeno mikrobov. Encimski Reakcijsko - je tisti del kompleksnega tehniko, ki omogoča, da prevesti rezultat imunskega odziva v obliki očesa viden in dostopen merjenjem rutinskih kemijske tehnike. Na podlagi takega načina struktura imunološki smo analizirali obe strani ločeno.

Imunski odziv, ki je? Kaj je protitelo, fragment?

Kaj je imunski odziv? Kaj je antigen?
Najprej analizirati, kaj imunski odziv. imunski odziv - specifični vezavni reakcijo antigena s protitelesom, da se tvori imunski kompleks. Kaj to pomeni? Na površini vsako celico koli organizma obstajajo posebne strukture imenovane antigeni. Antigeni na splošno - so molekule, ki prenašajo informacije o celici (kot so informacije o značko pri ljudeh, ki določa osnovne podatke o osebi).

Posamezne in specifičnih antigenov - kaj je to? Zakaj potrebujemo te antigene?

obstaja posamezne antigeni, ki je edinstvena na tem organizem. Ti posamezni antigeni so drugačni od vseh ljudi, je podobna med seboj, vendar še vedno drugačna. Dve identični izvodi posameznih antigenov ne obstaja!

Druga glavna vrsta antigena - je antigeni vrste, ki je neločljivo povezana koli posamezne vrste živih bitij. Na primer, oseba, ki je prisotna specifični antigen, ki je skupna vsem ljudem, pri miših pa je murine vrsta antigen, itd Na površini vsake celice so nujno prisotna vrste in posamezno antigen.

Specifične antigene celice imunskega sistema za priznanje. "- še ih"

Kako je priznanje antigen?

Imunske celice povezane s sumljive celice in nosi identifikacijsko je na posamezni antigen. imunski spomin "napisal" celica izgleda "svoje antigena." Torej, če je antigen sumljive celice ujema z opisom "njegov antigen", to pomeni, da je celica v svojem telesu in niso resni. Potem imunski celica "nevezana" in odide. In če je antigen ni isto kot opis "a", medtem ko je imunska celica prepozna celico kot "tujek" in zato potencialno nevaren za celotno organizem. V tem primeru je imunski celica ni "nevezana" in začne uničiti nevarno predmet. Natančnost takega imunološkega priznanje je neverjetno - 99,97%. praktično brez napak!

Kaj je protitelo imunski kompleks?
Kaj je protitelo?

Protiteles - posebna molekula, ki se nahaja na površini imunskih celic. To protitelo veže na antigen in sumljivih celic. Dodatne protiteles prenese informacije v celico, kjer je to priznanje, in prejme povratni signal dveh tipov "a" ali "nasprotnika". Ko se signal "a" protiteles moti komunikacijo z antigenom in sprošča celic.

Kaj je imunski kompleks?
Ko je signal "tujih" situacija odvija drugače. Protitelo ne prekine povezavo z antigenom, in obratno, tako, da pošlje posebne signale, povzroča "okrepitev". Biološko to pomeni, da drugi protitelesa v drugem delu celic začne premikati na območja, kjer obstaja nevarnost signala, ter tvorita vez med antigenom in ujet. Na koncu, se antigen obkrožena z vseh strani in trdno privyazan.Takoy antigen + protitelesa imenovanih imunski kompleks. Od tega trenutka, odstranjevanje antigena. Toda zdaj podrobnosti o procesu nevtralizacije antigen nas ne zanima.

Vrste protiteles (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Protitelesa - struktura proteina, ki ima vsakokrat s kemijskim imenom, ki se uporablja kot sinonim za izražanje protitelesa. tako Protitelesa so imunoglobulini =.

Obstaja pet vrst imunoglobulinov (Ig), ki se vežejo na različne vrste antigenov v različnih krajih človeškega telesa (npr kože, sluznice, krvi, in tako naprej. d.). To pomeni, da protitelesa imajo delitev dela. Ti imunoglobulini se imenujejo latinico - A, M, G, D, E in so označeni na naslednji način - IgA, IgM, IgG, IGD, IgE.

V diagnostiki uporabljajo le eno vrsto protiteles, ki je najbolj specifičen za opredeljeno mikrobov. To pomeni, da vezava protiteles so opredeljeni z antigen vedno zgodi. Najpogosteje uporabljena IgG in IgM.

To načelo imunski odziv (edinstven specifičnost in natančnost priznanja na biološkem predmeta določi) podlaga imunski analiza.V trdnosti visoko precizne protitelesa priznavajo antigene, točnost vseh metode imunološki je tudi boljši.

Encimska reakcija

Kaj Reakcijsko - encim? Kaj je afiniteta substrata in produkt?
Sedaj menijo reakcijo encimsko v metodi encimskim imunotestom.

Kaj je encimska reakcija?

Encimska reakcija - kemična reakcija, pri kateri je eno snov pretvori z encimom do drugega. Snov, ki deluje na encima substrat. Snov, ki je pridobljen z vplivom encima reakcijski produkt. Pri čemer je značilnost encimske reakcije, neka encim deluje le na določeno podlago. Ta lastnost encima, naj prizna "njihov" substrat imenuje afiniteta.

Tako je vsak encim nosi le en, posebno odziv nanj. Encimi v biološkem svetu pozna veliko različnih, kot tudi encimske reakcije. ELISA Diagnostični uporablja samo nekaj encimske reakcije - ne več kot 10. Pri tem izberemo tako encimskega reakcijski produkt, ki je obarvana snovi. Zakaj je encimska reakcija izdelki morajo biti pobarvane? Ker ni preprosta kemična metoda za izračun koncentracije učinkovine v obarvane raztopine - kolorimetrija.

Metoda kolorimetrija - bistvo in načelo

kolorimetrija uporablja merjenje barvno gostoto raztopine in z gostoto barve izračunane koncentracije veschestva.Pri to posebno napravo - kolorimetrom ukrepi barva gostote raztopine. V kolorimetrijo dveh možnih gostote barvo v odvisnosti od koncentracije snovi - je neposredno sorazmerna odvisnost ali obratno sorazmerna. Premosorazmeren, večja je koncentracija snovi, bolj intenzivna barva gostota raztopine. V obratnem sorazmerju, večja je koncentracija snovi, nižji barva gostote raztopine. Tehnično gledano je to poteka takole: sprejeti več rešitev z znano koncentracijo snovi merijo gostoto teh rešitev, je koncentracija narisane na gostoto barv (kalibracijski graf).

Nato merjenje gostote barve raztopine, koncentracija, ki se zdi, in kalibracijski graf so vrednosti koncentracije, ki ustreza ravni izmerjenih barvne gostote rastvora.V v sodobnih avtomatskih colorimeters ko se kalibracija izvede, potem je enota sama izdela umeritvena krivulja, ki ostaja v spominu, in merjenje samodejno.

peroksidazo: imunološkega najpogosteje uporablja naslednje encime alkalne fosfataze, avidin.

Kot kombinirano imunološko in encimske reakcije v ELISA? Zdaj bomo nadaljevali razmisliti dejansko encimsko imunski. Katere so faze, da vključuje in kaj se zgodi, če te reakcije? Povezane imunski preizkus je neposredne in posredne.

Direktno povezan imunski preizkus - faze

V neposredni ELISA z uporabo protiteles, da prepoznajo antigen skupaj z določeno oznako. Ta posebna oznaka je substrat reakcije encimsko.

Pritrditev antigen na površini antigen in spojino vdolbinic s protitelesom

Kako neposredna Encimsko imunski? Take biološkega materiala (kri, sluz ostružke, umazanije) in se shrani v posebnih vrtin. Biološki material ostane v vrtinah za 15-30 minut na antigene lahko prilepi na površino vodnjakov. Poleg tega v teh vdolbinice dodamo protitelo za odkrivanje antigena. To pomeni, da identificirajo antigeni, kot so sifilis, dodamo protitelesa proti antigenom sifilisom. Ta protitelesa so izdelani z industrijskimi metodami, in laboratorij kupiti pripravljen nabory.Dannuyu mešanico materiala in protitelesa pustimo nekaj časa (od 30 minut do 4-5 ur), da so protitelesa lahko najti in priti v stik z "njihovimi" antigenom.Chem bolj biološko antigeni vzorec, več stika protiteles z njimi.

Odstranjevanje "nepotrebnih" protitelesa

Kot smo že omenili, so protitelesa tako so povezane s specifičnimi protitelesi metkoy.Poskolku dodamo v prebitku, ne vsi od njih bo stik z antigenom in če ni antigena v vzorcu, se zato niti protitelo ne dotika z želenim antigenom. Za odstranitev "ekstra" protitelesa, vsebina vodnjakov samo vlije. Posledično so vsi "presežnega" protitelesa odstranijo, in so tisti, ki so povezana z antigeni so antigeni "prilepljena" na površino vdolbinic. Vdolbine večkrat speremo s posebno raztopino, ki vam omogoča, da opere vse "ekstra" protitelesa za.

Encimska reakcija - tvorba obarvanega spojine

Nato se začne drugo fazo - encimsko reakcijo. Sprane vrtine dodamo k raztopini encimom in pustimo stati 30-60 minut. Ta encim ima afiniteto do snov (posebno oznako), ki je povezan s protitelesom. Encimske reakcije smo izvajali, kot posledica katerega se ta posebna nalepka (substrat) pretvorimo v obarvan snov (produkt). Potem Postopek Kolorimetrija so, da je koncentracija obarvanega snovi. Ker se ta posebna oznaka povezana s protitelesom, nato koncentracija obarvanega reakcijskega produkta je enaka koncentraciji protiteles. Koncentracija protiteles enakih antigen koncentracijo. Tako kot rezultat analize, smo dobili odgovor, kakšna je koncentracija zaznanega mikroba ali hormona.

To je tisto, kar teče naravnost testom. Danes pa je bolj verjetno, da uporaba posredno testom, saj občutljivosti in natančnosti posredno višje kot neposredno. Torej, kaj je posredno encimsko imunski.

Posredno encima imunološki - faze

V posrednih ELISA dveh fazah. V prvi fazi se uporabljajo brez oznake protitelesa za zaznavni antigene, in v drugi fazi se uporablja na prvo označenih protiteles neoznačenega protiteles. To ni pridobljen direktno vezavo protitelesa na antigen, in dvojno preverjanje: vezava protiteles na antigen, nakar vezavo drugega kompleksa protitelesa s protitelesom + antigen. Značilno je, da protitelo za prvo stopnjo - miši in drugo - koze.

Pritrditev antigeni na površini vodnjakov in vezavo antigena z neoznačenega protitelesom
Tako kot pri neposrednem encimskim imunotestom izvedemo ograja biološkega materiala - krvne ostružki, umazanije. Raziskovanje biološki material dodamo v jamice in pustimo stati 15-30 minut za lepljenje na površinski antigeni vdolbinic. Nato jamice prispevajo nepoimenovani protiteles proti antigenom in pustimo, da se čas (1-5 ur) na protitelo stik z "njihovimi" antigene in imunskega nastalega kompleksa (prva stopnja). Nato odstranimo "presežek", nevezano protitelo z vlivanjem vsebino vdolbinic. Spiranjem s posebno raztopino za popolno odstranitev vseh brez vezanega protitelesa.

Vezava označenega protitelesa na antigen, kakšno neoznačeno protitelo +
Potem si drugi protitelesa - označeni, doda vodnjakov in spet pustimo stati nekaj časa - 15-30 minut (drugi krak). V tem času, označena protitelesa se vežejo na prvo - ni označeno in se tvori kompleks - protitelo + antigen + protitelesa. Vendar pa je označena, in označena protitelesa so uvedli v vodnjake, ki presegajo. Zato je potrebno ponovno odstraniti "ekstra", že označenih protiteles, ki se ne vežejo na neoznačeno protitelesa. Ta postopek se ponovi za polivanje vsebine vdolbinic in izpiranjem s posebno raztopino.

Encimska reakcija - tvorba obarvanega spojine
Nato uvesti encima izvajanje reakcije konverzije «oznake" v obarvano snovjo. Barva razvija v 5-30 minutah. Nato se izvede kolorimetrije in izračun koncentracije obarvanega snovi. Ker je koncentracija obarvanega snovi je označeno koncentracija protiteles in koncentracija sledila je enaka koncentraciji neoznačene protiteles, ki pa je enaka koncentraciji antigena. Tako dobimo koncentracijo antigena detektirati.
Takšna dvojna kontrola uporabo dveh različnih vrst protiteles izboljšanih občutljivost in specifičnost encimsko imunskim testom. Kljub podaljšanje časa za analizo in vključitev dodatnih korakov, te izgube kompenzirajo natančnost rezultat. Zato je v tem trenutku v veliki večini encimskih tehnik imunološki - to je posredno encim imunski test.

Katere bolezni se zazna Encimsko imunski diagnostiko?

Zdaj pa razmisli, kakšne bolezni in vse biološko aktivne snovi, ki jih encimsko imunskim testom odkriti. Snovi z encimskim imunotestom zaznani so prikazani v tabeli.


Spodnja tabela ni popoln seznam testov (samo najbolj pogosto), ELISA izvaja. Prinesite celoten seznam ni mogoča, saj bo zelo veliko in nenehno posodablja. Poleg laboratorijsko diagnostiko, ki ga encimsko imunskim testom se pogosto uporablja v znanstvenem raziskovanju.




Avtor: AK Nasedkina